فصل دوم
هدف از اين تحقيق بررسي ايمني زايي ژنهاي L7/L12 و P39 در موشهاي Balac است. بنابراين پس از جداسازي و تكثير ژنهاي فوق مراحل زير در اين تحقيق انجام گرفت.
1- لكون نمودن ژنهاي فوق در يك ناقل انتقال دهنده Cleaning vector
2- تعيين ترادف نوكلئوتيدي ژنهاي جداشده و مقايسه آن با ژنهاي L7/L12
3- كلون نمودن ژنها در پلاسميد بيان كننده پروكاريوني Procaryotic expression vector
4- توليد و تخليص پروتئينهاي L7/L12 و P39
5- كلون نمودن آنها در پلاسميد بيان كننده اوكاريوتي Eucaryotic expression vector
6- هاري كردن پلاسميدهاي فوق از آندوتوكسين
7- تزريق پلاسميدها، بسويه واكنش و سويه بيماريزا بروسلاآبورتوس به موش Balb/C
8- سنجشهاي ايمونولوژيك
باكتريها و پلاسميدهايي كه براي انجام اين پايان نامه استفاده دشه اند بترتيب زير مي باشند:
باكتريها: بروسلاآبورتوس سويه هاي 19S و 544 اشديشيالكي سويه
اشريشيالكي سويه BL21 – اشريشياكي سويه BL21(DE3(Plyss
پلاسميرها: PGEX4T1 – PRT 28a – SK+(pSK) - Pblue Script-PCDNA3
- جداسازي كروموزوم بروسلا آبورتوس 19S:
براي تكثير ج داسازي ژنهاي L7/L12 و P39 ابتدا كروموزوم باكتري جداسازي گرديد.